StStG Kohle: Synthese G-Protein-gekoppelter Rezeptoren in pilzbasierten zellfreien Systemen

Abstract

Im Vorhaben PZ-Syn+G wurde untersucht, inwieweit G-Protein-gekoppelte Rezeptoren (GPCRs) in zellfreien Systemen hergestellt und funktionell charakterisiert werden können. Im Fokus standen insbesondere der Endothelin-B-Rezeptor (ETBR) und der Adenosin-A2A-Rezeptor (A2AR). Hierzu wurden geeignete DNA-Template generiert, verschiedene zellfreie Expressionssysteme getestet und ergänzend zellbasierte Referenzsysteme aufgebaut. Für die funktionelle Charakterisierung wurden mehrere Assayformate etabliert, darunter Ligandbindungsassays und Split-Luciferase-basierte Ansätze. Das zentrale Ergebnis des Vorhabens ist die erfolgreiche Etablierung eines sensitiven und quantitativ auswertbaren Verfahrens zum Nachweis spezifischer Ligandbindung am zellfrei synthetisierten ETBR. Insgesamt zeigen die Ergebnisse, dass zellfreie Proteinsynthese in Kombination mit geeigneten Assays eine tragfähige Plattform für die Analyse schwer zugänglicher Membranproteine darstellt und Perspektiven für die technologische Verwertung insbesondere in den Bereichen der Wirkstoffforschung und Diagnostik eröffnet.