Verbundprojekt: Fighting cancer with optimal personalized immunotherapies (IMAGINE); Teilvorhaben: Maßgeschneiderte optische Sonden für die hochauflösende Mikroskopie und Verifizierung der Analyse von CAR T-Zellen

Abstract

Innerhalb des Verbundprojekts IMAGINE haben wir das Teilprojekt „Maßgeschneiderte optische Sonden für die hochauflösende Mikroskopie und Verifizierung der Analyse von CAR T-Zellen“ bearbeitet. Das Teilprojekt war in 2 Arbeitspakte (AP) aufgeteilt:

AP1: Antikörper-Farbstoffkonjugate für dSTORM und DNA PAINT AP2: Verifikation der neuen Super-Resolution Mikroskopie Systeme für CAR T-Zell-Therapie Applikationen Innerhalb des AP 1 wurden gemeinsam mit den Verbundpartnern Zelltypen und Oberflächenantigene definiert, die für die Detektion von Tumorzellen und CAR T-Zellen verwendet werden sollen. Im zweiten Schritt haben wir verschiedene Konjugationsmethoden, Antikörpertypen (Vollantikörper, Antikörper-Fragmente und Nanobodies) und Fluorochrome getestet. Die vielversprechendsten Ansätze wurden weiterentwickelt und die daraus resultierenden Konjugate wurden von den Partnern Massive Photonics/Arbeitsgruppe Jungmann und der Arbeitsgruppe Sauer getestet. Die Rückmeldung der Kooperationspartner und die entsprechende Lieferung weiterer Konjugate wurde im Einklang mit den Testungen kontinuierlich fortgesetzt. Innerhalb des AP2 erfolgte die Verifizierung eines der zwei im Verbundprojekt entwickelten Mikroskopie-Systeme. Es wurden technische Kenngrößen (Sensitivität und Spezifität) der quantitativen Detektion mittels Titration von Antikörperfluoreszenzsonden für die Analyse von Zelloberflächenproteinen getestet. Anschließend erfolgte ein Vergleich mit einer Referenzmethode, der Durchflusszytometrie. Eine Testung des zweiten Systems konnte nicht erfolgen, da es innerhalb des Projekts nicht wie geplant zur Verfügung stand.