FluMiKal - Standardisierung und Normung von Messmethoden zur Charakterisierung von Fluoreszenz-Mikroskopen mit fluoreszenzbasierten Kalibrierwerkzeugen

Abstract

Ziel des Projektes FluMiKal war die Entwicklung, Optimierung und Validierung von einfach handhabbaren und möglichst breit einsetzbaren Kalibrierwerkzeugen und normungsfähigen Messverfahren zur Charakterisierung gängiger Geräteparameter, die bei Weitfeld- und konfokalen Fluoreszenzmikroskopen inklusive Superauflösungs- und FLIM-Systemen (Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy), die detektierten Fluoreszenzsignale beeinflussen. Im Fokus standen dabei die wichtigsten Performance-Parameter wie Auflösung, PSF, chromatische Aberration, spektralen Empfindlichkeit sowie die Zuverlässigkeit der Bestimmung des analytspezifischen Parameters Fluoreszenz-lebensdauer im sichtbaren und nahinfraroten Spektralbereich. Hierfür wurde gemeinsam mit den Projektpartnern BAM und Universität Freiburg Anforderungsprofile der Kalibrierslides ausgearbeitet (Arbeitspaket 1) sowie Langzeittests mit DNA-Origami-Nanobeads unter verschiedenen Bedingungen durchgeführt (Arbeitspaket 2). Ferner wurden neue DNA-Origami-Strukturen als Basis für erweiterte Nanometerlineale entwickelt (Arbeitspaket 3 und 4). Des Weiteren wurde in mehreren Iterationsschritten eine Reihe von Slides mit DNA-Origami-Nanobeads in verschiedenen Konfigurationen hergestellt, welche beim Projektpartner Universität Freiburg getestet und vermessen wurden (Arbeitspaket 5). Schließlich wurden Standards für die Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy (FLIM) entwickelt (Arbeitspaket 8).